产 品 名 称 | 动物组织基因组DNA提取试剂盒 Animal Tissue DNA Isolation Kit |
货 号 | DE-05011 |
规 格 | 50T |
价 格 | ¥397.00 |
描 述 | 快速提取纯化多种来源的基因组DNA，如：动物组织、细胞等。 |
产品介绍
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的DNA-Only Column、全新的Foregene Protease以及独特的缓冲液体系，可以在30-50分钟内从各种培养细胞、动物组织中提取到高质量的基因组DNA。
离心柱中采用的DNA-Only硅胶膜为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA，可最大限度的去除RNA、杂质蛋白、离子及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。组织块只需10-50mg即可得到5-80μg基因组DNA。
试剂盒应用
该试剂盒适用于多种新鲜或冻存的培养细胞、动物组织基因组DNA提取纯化。
纯化DNA的应用
动物组织基因组DNA提取试剂盒纯化获得的基因组DNA纯度高，可用于常规分子生物学操作，如：酶切、PCR、Southern杂交、文库构建等实验。
DNA提取得率和纯度
动物组织基因组DNA提取得率与组织的来源、保存条件、保存时间、用量等因素相关，所得基因组DNA纯度均满足常规分子生物学实验操作，其OD260/280在1.7-1.9之间。使用该试剂盒提取基因组DNA的得率见下表：
样本来源 | 样本用量 | DNA产量 (μg) | OD260/280 |
细胞 | 106 | 15-30 | 1.7-1.9 |
肝脏 | 10mg | 4-10 | 1.7-1.9 |
心脏 | 10mg | 2-5 | 1.7-1.9 |
脾脏 | 10mg | 5-30 | 1.7-1.9 |
大脑 | 10mg | 5-10 | 1.7-1.9 |
注意：此表数据仅作参考，实际操作中由于所用材料的存储条件、操作熟练度等因素影响，所得数据会与此表数据有些许出入。
试剂盒内容
Buffer L1：提供动物组织样本酶解环境。
Foregene Protease：在Buffer L1的环境下酶解组织样本。
Buffer L2：失活Foregene Protease，并提供DNA上柱环境。
Buffer PW：去除DNA中的蛋白质、RNA等杂质。
Buffer WB：去除DNA中的残留的盐离子。
Buffer EB：洗脱纯化柱膜上的DNA。
DNA-only Column：特异吸附裂解产物中的基因组DNA。
产品信息
型号 | 离心柱型 | 纯化组件 | Foregene离心柱、试剂 |
通量 | 1-24个样品 | 制备时间 | 30-50 min (24个样品) |
离心机 | 台式离心机 | 组织酶解物分离 | 离心分离 |
离心柱液体盛装量 | 800 μL | 纯化柱DNA承载量 | 80 μg |
洗脱体积 | 100-200 μL | 组织样本处理量 | 10-50 mg |
操作流程
说明书
产品文献
A long noncoding RNA distributed in both nucleus and cytoplasm operates in the PYCARD-regulated apoptosis by coordinating the epigenetic and translational regulation
Hui Miao, Linlin Wang, Haomiao Zhan, Jiangshan Dai, Yanbo Chang, Fan Wu, Tao Liu, Zhongyu Liu, Chunfang Gao, Ling Li, Xu Song
四川大学生命科学学院功能基因组学与生物信息学中心
教育部生物资源与生态环境重点实验室
Plos Genetics ( IF 5.54 ) Pub Date : 2019-05-14 , DOI: 10.1371/journal.pgen.1008144
文章链接：https://journals.plos.org/plosgenetics/article?id=10.1371%2Fjournal.pgen.1008144#sec011
MSDS
COA
提取过程中无法获得基因组DNA
Answer
通常有多种因素会影响基因组DNA产量，包括样本来源、样本保存条件、样本的预处理、操作等。
1. 组织样本保存不当或保存时间太长，导致基因组DNA已经降解。
建议：组织样本保存于液氮或者-80℃；尽量使用新近采集组织样本进行基因组DNA的提取。
2. 组织用量过少可能导致提取不到相应的基因组DNA。
建议：对于保存时间很长或基因组DNA降解比较厉害的组织样本，可以适当增加组织样本的用量，以便提取获得可观的基因组DNA。可以根据DNA需要确定样本的用量，但是不宜超过50mg。
3. Foregene Protease保存不当，导致其活性降低或失活。
建议：确认Foregene Protease保存条件或者更换新的Foregene Protease进行酶解反应。
4. 试剂盒保存不当或存放时间太长，导致试剂盒里面某些组分失效。
建议：购置新的动物组织基因组DNA提取试剂盒进行相关操作。
5. 试剂盒使用不当，比如有些组织需要专用的试剂盒进行处理。
建议：购置样本专用的试剂盒，比如土壤基因组DNA的提取，需要购买专用的Soil DNA Isolation Kit。
6. Buffer WB没有添加无水乙醇。
建议：确认Buffer WB中添加正确体积的无水乙醇。
7. 洗脱液没有正确滴加到硅胶膜上。
建议：将65℃预热的洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置5分钟增加洗脱效率。
提取获得低产量基因组DNA
Answer
1. 样本保存不当或保存时间太长，导致基因组DNA降解。
建议：组织样本保存于液氮或者-80°C；尽量使用新近采集组织样本进行基因组DNA的提取。
2. 组织样本用量过少，提取到的基因组DNA含量会较少。
建议：对于保存时间过长或基因组DNA降解比较厉害的组织样本，可以适当增加组织样本的用量，以便提取获得可观的基因组DNA。可以根据DNA需要确定样本的用量，但是不宜超过50mg。
3. 样本用量过多，导致消化不完全，离心不彻底，上柱离心时可能堵塞纯化柱，提取获得的基因组DNA会较少。
建议：根据组织的不同，用量在10-50mg内调整，当出现消化不完全或纯化柱堵塞时，请减少相应的组织用量。
4. 样本没有进行预处理或预处理的不彻底。
建议：特殊保存的样本或者一些比较特殊的样本一定要进行酶解前预处理，这样可以去除样本保存液或影响蛋白酶活性的因子，使酶解反应进行的更彻底，提取获得更高得率的基因组DNA。
5. 特殊的保存的组织样本，比如石蜡包埋、鼠尾等。
建议：购买专用的基因组DNA提取试剂盒，如石蜡包埋样本，可选购FFPE DNA IsolationKit；鼠尾样本，可选购Mouse Tail DNA Mini Kit。这些组织用其专门的试剂盒处理，DNA提取得率会更高，效果更理想。
6. Foregene Protease保存不当，导致其活性降低或失活。
建议：确认Foregene Protease保存条件或者更换新的Foregene Protease进行酶解反应。
7. 洗脱液问题。
建议：请使用Buffer EB进行洗脱；如果使用ddH2O或其他洗脱液，确认洗脱液的pH值在7.0-8.5之间。
8. 洗脱液没有正确滴加。
建议：请将洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置5分钟增加洗脱效率。
9. 洗脱液体积太少。
建议：请按说明书上要求使用洗脱液进行基因组DNA洗脱，最少不要低于100μL。
提取获得基因组DNA纯度低
Answer
基因组DNA纯度低会导致下游实验的失败或效果不理想，如：酶切不开，PCR得不到目的基因片段等。
1. 杂蛋白污染、RNA污染。
分析：没有使用Buffer PW洗涤纯化柱；Buffer PW洗涤纯化柱没有使用正确的离心转速。
建议：在上清液过柱时尽量保证上清液中无沉淀；务必按说明书进行Buffer PW洗涤纯化柱，并且此步骤不能省略。
2. 杂质离子污染。
分析：省略了Buffer WB洗涤纯化柱或者只洗涤了一次，导致残留的离子污染。
建议：务必按说明书使用Buffer WB洗涤2次，以尽量去除残留的离子。
3. RNA酶污染。
分析：Buffer中添加了外源的RNA酶；Buffer PW洗涤操作不正确，导致RNA酶残留，影响下游RNA实验操作，如：体外转录等。
建议：Foregene系列核酸提取试剂盒无需额外添加RNA酶即可去除RNA，Animal Tissue DNA Isolation Kit里面所有试剂均无需添加RNA酶；务必按说明书进行Buffer PW洗涤纯化柱，并且此步骤不能省略。
4. 乙醇残留。
分析：Buffer WB洗涤纯化柱后，没有进行空管离心操作。
建议：按说明书进行正确的空管离心操作。
5. 其他杂质污染。
分析：保存样本或特殊样本没有进行预处理。
建议：按操作说明对样本进行彻底的预处理。
